Nascido em Kent, Connecticut, graduou-se na Escola de Design de Rhode Island, onde estudou animação, alcançando o grau de bacharel em Belas Artes. Seth foi um dos animadores e roteiristas de Hanna-Barbera para vários dos programas de televisão criados pela empresa, incluindo Johnny Bravo, Cow and Chicken, Dexter's Laboratory e I Am Weasel, antes de criar sua própria série para a 20th Century Fox em 1999, chamada de Family Guy. Após isso, tornou-se o cocriador de American Dad! em 2005 e de The Cleveland Show em 2009, para a FOX. Passou a trabalhar como produtor executivo do seriado The Winner da Fox.

Como ator, ele fez aparições em séries como Gilmore Girls, The War at Home e FlashForward. Ele tem interesse em ficção científica e fantasia, o que o levou a fazer pequenas participações como convidado em Star Trek: Enterprise e como dublador do personagem de Johann Kraus em Hellboy II: The Golden Army, de Guillermo del Toro. Em 2008, ele criou sua própria série no YouTube intitulada Seth MacFarlane's Cavalcade of Cartoon Comedy. Como cantor, já se apresentou em vários locais, incluindo o Carnegie Hall e o Royal Albert Hall.