Santana é apresentada ao lado de Quinn e Brittany como as três líderes de torcida mais populares da escola fictícia William McKinley High School em Lima, Ohio, onde o show é apresentado. Ela se junta ao Glee Clube da escola, apenas para espiona-lo para Sue Sylvester (Jane Lynch), a treinadora da equipe de torcida das Cheerios. À medida que a temporada progride, ela se torna mais simpática a outros membros do clube glee, dizendo que ela vai ficar no clube, não porque Sue está forçando ela, mas proque ela gosta. Ela tem vários relacionamentos românticos, encontros com (Mark Salling), tirando a virgindade de (Cory Monteith), e exerce uma amizade com benefícios com Brittany. Na segunda temporada, a série retrata o antagonismo de Santana e sua agressividade sexual com os meninos; mais tarde é revelado que sua atitude cruel é porque ela está lutando com seus sentimentos românticos em relação a Brittany, e, posteriormente, com sua identidade lésbica. Este enredo foi recebido positivamente pela crítica.O que significou um segmento para a série